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石蜡切片厚度一般为多少 石蜡切片制作过程是什么

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摘要:石蜡切片(paraffin section)组织学常规制片技术中最为广泛应用的方法。石蜡切片不仅用于观察正常细胞组织的形态结构,也是病理学和法医学等学科用以研究、观察及判断细胞组织的形态变化的主要方法,而且也已相当广泛地用于其他许多学科领域的研究中。那么下面我们就一起看看,石蜡切片厚度一般为多少以及石蜡切片制作过程是什么吧。

一、石蜡切片厚度一般为多少

石蜡切片厚度通常为4~7微米,切出一片接一片的蜡带,用毛笔轻托轻放在纸上。这个厚度通常可以满足大部分实验室的需求。如果需要更薄的切片厚度,则可以使用微切机进行切割,厚度可达1-2微米,但这种切片会更脆弱,操作难度更大。

二、石蜡切片制作过程是什么

石蜡切片的制作步骤如下:

1、组织包埋

(1)乙醇脱水:组织经不同浓度的乙醇溶液进行逐级脱水70%、80%、90%、95%、100%、100%,各级乙醇 40min(注意:骨性及钙化组织需在JYBL-Ⅱ脱钙液中浸泡24h,待组织软化后再进行乙醇脱水步骤)。

(2)透明:组织依次浸泡于三个二甲苯中,每缸各1h。

3)浸蜡:组织依次浸泡于三个石蜡缸中,每缸各1h。

(4)包埋:将液态的石蜡倒入模具盒中,再将浸好蜡的组织块平放底部,注意切面方向朝下放置,待石蜡凝固后去掉包埋框,完全冷却变硬后再修整蜡块,组织外围的石蜡保留适中以便切片。

2、切片与贴片

切片制作将预冷的蜡块固定在石蜡切片机上,使石蜡块的切面与刀口成平行方向,刀的倾斜度通常15℃,转动轮转推进器,调节切片厚度为4μm,切成厚度均匀的切片。

左手持毛笔,右手旋动切片机转把,切片带出来之后,用毛笔轻轻托起,再用镊子轻镊蜡片,以正面放入展片箱中,其水温45℃左右。待摊平整后捞片。贴附切片左手持载玻片之一端,垂直入水去附贴切片,右手用镊子辅助推动,附贴至玻片上的三分之二处。切片贴附后,放在空气中稍晾干,放置65℃烤片机上烤1h,再放置烘箱内烘烤2h。

3、石蜡切片脱蜡至水

依次将石蜡切片放入二甲苯Ⅰ10min-二甲苯Ⅱ10min-二甲苯Ⅲ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-50%酒精5min梯度脱蜡。

4、HE染色

石蜡切片入苏木素染0.5-1分钟min,自来水漂洗,1%盐酸酒精分化数秒,自来水漂洗,然后1%氨水水溶液返蓝1min,流水冲洗数秒,放入伊红染液中染色数秒,流水漂洗。

5、脱水封片

石蜡切片依次放入75%乙醇2min-85%乙醇2min-无水乙醇5min-无水乙醇5min-二甲苯5min透明,将切片从二甲苯拿出来中性树胶封片。

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