培养基灭菌的方法有哪些 培养基灭菌用哪种方法好

一、培养基灭菌的方法有哪些

培养基配制好后，必须立即灭菌，因为如果长时间不进行灭菌，培养料内的微生物就会在料内发酵生长，从而破坏培养基内的营养成分。一般来说，培养基的灭菌方法主要有以下六种：

1、干热灭菌

多用于耐热器皿灭菌，例如移液管和玻璃平皿等、玻璃试管或者金属器皿等等，可在170摄氏度灭菌2-4h，也可在200所说的灭菌0.5-1h。接种环，接种针等、涂布棒之类的实验器材，可用酒精灯直接灼烧灭菌。

灭菌效果：灭菌效果好，能杀死一切微生物，芽孢也不例外。

注意事项：干热灭菌过程的热穿透效果差且比较慢，因此在烘箱内进行干热灭菌时，不可摆放过满；塑料、橡胶等不耐热材质不可采用此方法灭菌；纸、棉的灭菌温度不能超过170℃。

2、高压蒸气灭菌（湿热灭菌）

通常用于实验室大部分培养基的灭菌，亦可用在玻璃器皿上、金属器皿灭菌。通常采用121°C高压灭菌15-20min或116°C高压灭菌30min，灭菌参数可以依据培养基的不同而调节。

灭菌效果：它能杀死一切微生物，芽孢也不例外。

注意事项：灭菌时冷空气没有排出、培养基本身含有过多的芽孢、灭菌方式不当、灭菌锅中的物品放置过满，均会造成灭菌的失败；在进行容器灭菌时，容器不可密封，需与灭菌锅内空气流通。

3、水浴-加热-流动蒸汽灭菌

常用于含有不耐热成分培养基的灭菌，如XLD琼脂等、亚硒酸盐胱氨酸增菌液等、亚硫酸铋琼脂等等。用流动蒸汽对培养基进行灭菌，若无对应流动蒸汽灭菌设备，既可用水浴加热，也可用“蒸”法杀菌。

灭菌效果：能杀死微生物的繁殖体，无法杀死芽孢体，用这种方法杀菌的培养基，一般抑菌性较强，或者需要很短的时间。

注意事项：不同培养基成分耐热性有差别，加热时应注意，如将含有亚硒酸盐的培养基（SC、SBG等）加热到90°C左右，过高的加热可导致亚硒酸氢钠的分解，培养基变红色，含有琼脂的培养基可以加热沸腾4-6次，也可以沸水浴后20-30min让琼脂充分溶解。

4、过滤灭菌

多用于抗生素或含有不耐热成分的培养基灭菌，通常采用孔径为0.22μm微孔滤膜或者滤芯过滤除菌。实验室生产无菌空气时亦可使用此法，采用特殊滤芯或者滤网，过滤和除菌空气。

灭菌效果：能去除常见的细菌，真菌和芽孢体，却无法去除支原体，病毒和其他体积微小的生物。

注意事项：使用前通常需按照说明书使滤膜或滤芯浸湿；需要严格遵守过滤器或者滤膜的指示，速度过快或者过滤体积过大都会造成滤膜的断裂和除菌的失败；黏度较大或有沉淀的培养基不适合用此方式除菌。

5、辐照灭菌

微波、紫外线、X射线、γ射线都可以进行灭菌。γ射线具有很强的穿透力，灭菌效果良好，在食品中得到了广泛的应用、药品行业的产品灭菌，亦多用于微生物培养基中、实验器材的灭菌。某些特殊培养基或者添加剂成分，由于不宜采用高温蒸汽灭菌、过滤除菌等等，可用γ射线照射灭菌。紫外线杀菌作用弱，很少有穿透力，一般只适用于实验室内空气或者物体表面的杀菌。

灭菌效果：γ射线具有良好的灭菌和穿透力，能杀灭一切微生物，芽孢体也不例外。

注意事项：并非所有培养基都可以采用γ射线辐照灭菌方式，一些染料或不稳定成分经辐照后会发生变化；γ射线对琼脂有一定的损伤，所以在固体培养基灭菌的过程中，辐照剂量及琼脂的加入量均需适当调整；玻璃制品、金属制品一般不可采用此方法灭菌。

6、化学试剂灭菌

通常用环氧乙烷杀菌，及各种消毒剂的浸泡灭菌。环氧乙烷在平皿中曾经得到广泛应用、对一次性医疗产品进行灭菌，却因环境污染大，灭过菌后的制品需要较长时间放置，让环氧乙烷散去，目前已逐渐为其他灭菌方式所代替。

灭菌效果：不同消毒剂的杀灭效果是有区别的，粗略地可以分为低效消毒剂、中，高效消毒剂。环氧乙烷是一种高效消毒剂，能杀死含有芽孢等一切微生物。

注意事项：此类灭菌方式通常会有残留，且对环境有污染，因此一般不适合用于直接进行微生物培养相关器皿灭菌；杀菌能力越强的消毒剂，刺激性、腐蚀性、毒性往往越大，使用时需注意防护。

二、培养基灭菌用哪种方法好

培养基的灭菌方法众多，采用不适当的灭菌方法可能会破坏培养基的质量，会改变颜色、透明度降低、pH变化等，那么哪种方法比较好呢？

由于不同微生物培养需要的培养基不同，灭菌方法的选择方面也有所不同，一般来说，培养基的灭菌方法应按照说明书或验证试验参数来采用不同方法，常规的是采用湿热灭菌，特殊要求的采用薄膜过滤等。