植物蛋白提取工艺流程 植物蛋白提取方法有哪些

一、植物蛋白提取工艺流程

1、准备工作

首先，你需要称取50-100mg的植物组织，放到一个1.5mL的离心管里。然后加入200μL的裂解液一，用研磨棒把植物组织磨碎，让它和裂解液充分混合。接着，把离心管放到冰上，静置10分钟。这个步骤很重要，能让蛋白更稳定。

2、过滤和离心

接下来，把过滤柱放到收集管里，把第一步中的匀浆液倒进过滤柱中。然后，用13800g（大约14000rpm）离心5分钟。你会得到一个滤液，这个滤液可以直接用来做SDS-PAGE电泳，不过要注意，因为提取的蛋白纯度不高，可能会受到一些糖类、色素和无机盐的干扰。

3、进一步纯化

向滤液中加入等体积的试剂二，漩涡震荡20秒，再用13800g离心5分钟。这样溶液会分层，去掉上层溶液。然后，加入1mL预冷的试剂三，放到-20℃冰箱里，静置10-20分钟。如果植物组织量比较少，可以延长到过夜。接着，用13800g离心10分钟，弃上清。

4、再次洗涤

再加入500μL预冷的试剂四，重悬沉淀，用13800g离心5分钟，弃上清。这个步骤重复一次，确保蛋白纯度更高。

5、干燥和溶解

室温开盖静置5-10分钟，让沉淀风干。然后，用合适的缓冲液溶解沉淀，推荐使用Tris-Cl（pH8.8），或者直接用1×SDS-PAGE上样缓冲液溶解，进行电泳测试。

二、植物蛋白提取方法有哪些

在植物组织蛋白质提取过程中，常用的提取方法包括研磨-提取法、氯醋酸-丙酮沉淀法及TRIzol法等。

1、研磨-提取法中，首先将样品置于研钵中用液氮研磨，然后加入提取液并静置，之后进行离心处理。提取液由1M Tris-HCl（pH 8）、甘油、聚乙烯吡咯烷酮组成。此方法特别适用于SDS-PAGE电泳。提取后的上清液可用于进一步的蛋白质分析。

2、氯醋酸-丙酮沉淀法则适用于植物组织的蛋白质提取，尤其适合双向电泳。该方法包括研磨、加入提取液、离心、丙酮沉淀等步骤。提取液含10%TCA和0.07%β-巯基乙醇的丙酮，裂解液则由尿素、CHAPS、DTT等组成。

3、对于肠黏膜等组织，TRIzol法是一种常用的蛋白质提取方法。此方法包括异丙醇沉淀、盐酸胍/95%乙醇沉淀、乙醇溶解等步骤。在处理过程中，存在沉淀不溶解及SDS结晶等问题。为解决这些问题，可以使用提蛋白试剂盒，并确保组织碎成适中的大小，立即加入2X BUFFER并煮沸5-10分钟。

4、在水稻苗、叶鞘、根等植物材料的蛋白质提取中，一般采用研磨后加入lysis buffer，离心取上清的方法。lysis buffer主要由尿素、NP-40、AMPHOLINE、2-ME、PVP-40等组成。

5、对于秧苗蛋白质样品的提取，Davermal等（1986）提出的方法较为常用。具体步骤包括剪碎材料，加入PVP-40及石英砂，用液氮研磨，加入三氯乙酸（丙酮配制，含10mM即0.07%β-巯基乙醇），离心弃上清，复溶于丙酮，再沉淀并复溶于UKS液，温育后离心取上清即可上样电泳。

6、在植物根中蛋白质的抽取过程中，主要步骤包括研磨、加入1M KH2PO4 K2HPO4缓冲液、离心、取上层液。此方法适用于植物根中蛋白质的提取。

三、植物蛋白提取注意事项

1、尽可能提取完全或降低样本复杂度，只集中提取目的蛋白。

2、保持蛋白处于溶解状态（通过裂解液的pH盐浓度，表面活性剂，还原剂等的选择）。

3、提取过程防止蛋白降解、聚集、沉淀、修饰等（低温操作，加入合适的蛋白酶和磷酸酶抑制剂）。

4、尽量除去核酸、多糖、脂类等干扰分子（通过加入核酸酶或采取不同提取策略）。

5、样品分装，长期于-80℃保存，避免反复冻融。